1.2.2 IC50（半数抑制浓度）和IL-1a的体外测量

人角质形成细胞(HaCaT)培养：HaCaT细胞由国家认证细胞库保藏和提供。细胞在补充有热灭活胎牛血清(10%)、L-谷氨酰胺(2 mmol/L)、青霉素和链霉素(100 U/mL)的DMEM中，在37℃、5%CO2的湿润气氛中培养。细胞每3天以1:3的比例传代。

单层细胞活力测定：使用CCK-8法分析HaCaT细胞活力。简言之，将细胞培养并以每孔1 x 10^4个细胞的密度接种在96孔板中。然后用不同浓度的各种表面活性剂样品处理HaCaT细胞24小时。然后加入CCK-8溶液，在37℃下孵育1小时。用酶标仪在450 nm处测量吸光度。数据以阴性对照的百分比表示（即%存活率）。

酶联免疫吸附(ELISA)测定：HaCaT细胞用不同浓度的各种样品处理24小时。表面活性剂暴露后，回收条件培养基，离心并用于测定细胞外IL-1a的释放。根据制造商的说明进行分析。

1.2.3体外温和性比色指数(CIM)和Zeta电位

体外CIM测量：将一片D-squame胶带应用于指定区域。使用压头确保胶带均匀粘附在皮肤上10秒。每个测试区域收集两条胶带，将第二条胶带浸入10%稀释溶液中10分钟。然后用流动自来水冲洗一分钟（直到水变清），然后风干。之后，将胶带用碱性品红甲苯胺蓝染料溶液染色3分钟，然后用流动自来水冲洗一分钟。招募了31名志愿者进行测试，每位受试者（18-60岁）均签署了书面知情同意书，研究方案经内部审查委员会批准。受试者总体健康状况良好，测试部位（前臂屈侧）没有纹身、割伤、划痕、擦伤和疤痕。

使用CM-26d色度计测量染色程度。在每次测量开始前进行校准以确保准确性。使用CIE Lab*标度从每个D-squame样品进行测量。使用以下公式计算CIM：

CIM=L-C=L-[(a)^2+(b*)^2]^{1/2}(1)

其中L代表亮度，a是红-绿，b是黄-蓝，C是彩度。

CIM值越高，产品的温和性越好。

使用MICROTRAC MRB Zeta电位分析仪STABINO ZETA测量每种测试溶液的Zeta电位。每个样品至少收集12个数据。溶液用蒸馏水稀释10倍，最终溶液中表面活性剂的活性物含量为1.8%，与CIM测试条件相同。

1.2.4人体皮肤斑贴试验

人体皮肤斑贴试验：封闭斑贴试验按照《化妆品安全技术规范》(2015)第七章第二节方法6.1进行。实施皮肤反应分级。并根据公式计算刺激得分：

IS=Σ(同一等级在各时间点的总发生次数*反应等级)(2)

TIS=IS/样本量

其中IS代表刺激得分；TIS代表总刺激得分。

招募了44名志愿者，获得33份有效数据。每位受试者（18-60岁）均签署了书面知情同意书，研究方案经内部审查委员会批准。受试者总体健康状况良好，测试部位（前臂屈侧）没有纹身、割伤、划痕、擦伤和疤痕。表面活性剂复合物在使用于前臂皮肤前稀释至2%。因此，表面活性剂的活性物含量为0.36%，高于常规斑贴测试。

1.2.5统计分析

细胞模型或体外方法的所有结果均显示为平均值±标准差(SD)或平均值±平均值的标准误差(SEM)。SD和SEM根据至少3个独立实验的值计算，每个实验有3个重复。

皮肤斑贴试验的结果用SPSS 27进行分析。评估数据不呈正态分布，采用Wilcoxon符号秩检验方法进行统计分析。统计方法的显著性水平为P<0.05。

2结果与讨论

如前所述，由于技术限制，很难通过生物过程生产具有足够清洁能力的海藻糖脂。本研究中使用的海藻糖脂来自酯交换过程，烷基链长度为12至14个碳。本文评估了海藻糖脂及其复合物的泡沫和温和性性能。

2.1单一表面活性剂和表面活性剂复合物的理化性质

表2总结了本研究中使用的所有单一表面活性剂在25℃和0.1%活性物条件下的表面张力值。SMCT的表面张力最低(20.50 mN/m)，其次是海藻糖脂(24.45 mN/m)，而CAPB的表面张力最高(33.40 mN/m)。

表2表面活性剂在25℃和0.1%活性物时的表面张力

如图2所示，比较了海藻糖脂和其他常见化妆品表面活性剂在pH 6.5下的发泡性能。所有表面活性剂，包括海藻糖脂，在pH 6.5下都能解离并具有表面活性。结果表明，阴离子表面活性剂如SMCT或SLES的发泡能力最好，其次是癸基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜碱、海藻糖脂和月桂基葡糖苷。这与普遍理解一致，即阴离子表面活性剂通常具有良好的去污力和发泡性能，而非离子表面活性剂由于缺乏带电头基而相对较弱。在阴离子表面活性剂中，SMCT的泡沫体积优于SLES。这与表2中SMCT的表面张力低于SLES有关。作为一种新型非离子表面活性剂，海藻糖脂的泡沫体积优于LG，但仍不如DG。这可能归因于它们碳链分布的差异以及表面张力的差异。与LG相比，DG具有较短的碳链，更容易迁移到气液界面，因此它们的发泡性能也不同。本研究中使用的海藻糖脂具有与LG相似的碳链分布，但如表2所示，其表面张力较低，使其具有更好的泡沫性能。